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PCR潔凈實(shí)驗(yàn)室

日期:2021-07-27

PCR實(shí)驗(yàn)指的是基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn),其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,PCR實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,例如:乙型肝炎,禽疫病、艾滋病檢測(cè),癌基因的檢測(cè)和診斷,個(gè)體識(shí)別,DNA指紋,親子鑒定及法醫(yī)物證等。



一、PCR實(shí)驗(yàn)室布局

1、PCR實(shí)驗(yàn)室原則上分為:①試劑準(zhǔn)備區(qū);②樣品制備區(qū);③擴(kuò)增區(qū);④擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),共四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域。并設(shè)有專用走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。

2、不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。


   

二、實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備

1、試劑準(zhǔn)備區(qū):

① 主要進(jìn)行試劑的制備,分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)域。

② 試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。

③ 本區(qū)主要設(shè)備有冰箱,天平,離心機(jī),加樣器,振蕩器等。

④ 本區(qū)對(duì)氣流壓力的控制,并沒有嚴(yán)格的要求,一般為+10Pa。

2、樣品制備區(qū):

① 主要進(jìn)行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。

② 本區(qū)主要設(shè)備有冰箱,生物安全柜,離心機(jī),加樣器,振蕩器等。

③ 本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染,壓力一般設(shè)計(jì)為+10Pa。

3、擴(kuò)增區(qū):

① 主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增項(xiàng)目。

② 已制備的DNA模板(來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

③ 本區(qū)主要設(shè)備有:冰箱,加樣器,離心機(jī),擴(kuò)增儀等。

④ 本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶從本區(qū)漏出,壓力一般設(shè)計(jì)為-25Pa。

4、 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):

① 主要進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。

② 本區(qū)主要設(shè)備有加樣器,洗板機(jī)、酶標(biāo)儀和水浴箱等。

③ 本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域,壓力一般設(shè)計(jì)為-25Pa。


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